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MaxCyte電穿孔技術:病毒載體生產的新革命

發(fā)布日期:2024-11-22      瀏覽次數(shù):250

01. 研究背景

(1) 研究問題:這篇文章主要探討了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體(包括腺相關病毒和慢病毒)生產的方法和效率。

(2) 研究難點:傳統(tǒng)的病毒載體生產技術勞動密集、步驟多且效率低,難以滿足大規(guī)模生產的需求。

(3) 相關工作:MaxCyte的流式電穿孔技術作為一種通用的瞬時轉染平臺,旨在解決病毒載體生產的諸多問題。



02. 研究方法

提出了使用MaxCyte流式電穿孔技術進行病毒載體生產的方法。具體來說包括:

(1) 細胞類型:該技術適用于貼壁細胞和懸浮細胞。

(2) 多質粒共轉染:MaxCyte系統(tǒng)可以同時轉染多個質粒,包括大質粒,從而制造復雜的病毒載體。

(3) 可擴展性:MaxCyte系統(tǒng)在不同規(guī)模的細胞培養(yǎng)中表現(xiàn)出一致的高轉染效率和細胞活力。



03. 實驗設計

(1) 大規(guī)模慢病毒生產:在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染。

•  HEK 293FT細胞在轉染前2-3天在10層細胞工廠中接種。

•  使用流式電穿孔技術進行共轉染,每天收集培養(yǎng)基并測量轉導單位。


(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產:懸浮適應的HEK 293FT細胞在10L Wave Cellbags中培養(yǎng),通過流式電穿孔技術轉染慢病毒組件質粒。

•  轉染后的細胞被返回Cellbags中。

•  在GMP合規(guī)的核心設施中進行3次生產運行,每次運行均顯示出高滴度。


(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產一致性通過靜態(tài)電穿孔和流式電穿孔(使用MaxCyte)。

•  測量轉染后48小時的慢病毒滴度,結果顯示無論規(guī)模大小,生產力一致。


(4) 高效的高滴度AAV生產:在貼壁HEK細胞中使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染。

•  轉染后48小時,幾乎100%的轉染細胞表現(xiàn)出強勁的轉基因表達。

•  通過qPCR分析測量細胞沉淀中的高滴度AAV。



04. 結果與分析

(1) 大規(guī)模慢病毒生產:在貼壁HEK細胞中,使用MaxCyte STX進行四質粒共轉染,每天收集培養(yǎng)基并測量轉導單位,結果顯示高效的生產能力。

(2) 懸浮細胞中的慢病毒生產:在懸浮適應的HEK 293FT細胞中,使用MaxCyte系統(tǒng)進行生產,3次生產運行均顯示出高滴度,表明該技術在懸浮細胞中的可擴展性和一致性。

(3) 不同規(guī)模下的慢病毒生產一致性:通過靜態(tài)和流式電穿孔在HEK細胞中生產慢病毒,結果顯示無論規(guī)模大小,生產力一致。

(4) 高效的高滴度AAV生產:在貼壁HEK細胞中,使用MaxCyte STX進行三質粒共轉染,結果顯示幾乎100%的轉染細胞表現(xiàn)出強勁的轉基因表達,并且通過qPCR分析測量到高滴度的AAV。




總體結論

MaxCyte的可擴展電穿孔技術允許對貼壁和懸浮適應細胞進行高效轉染。該技術能夠共轉染多個質粒和大質粒,制造復雜的病毒載體。MaxCyte轉染過程的一致性使得無論培養(yǎng)規(guī)模如何,生產產量都具有一致性。高效的懸浮細胞轉染簡化了使用MaxCyte過程進行病毒載體制造的可擴展性。通過MaxCyte電穿孔技術生成的高滴度AAV展示了該技術在制造應用中的多樣性。



* 本文轉載自「拓普百奧」微信公眾號,作者:宇文數(shù)學(已獲得作者授權)




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